Redigerer Western blot (avsnitt)

== Fremgangsmåte ==
Det første steget ved en WB-analyse er å frembringe proteininnholdet fra de [[celle]]r eller [[vev]] som skal studeres. For å kunne separere proteinene fra cellenes andre bestanddeler må man første behandle celler og vev slik at de kan analyseres. Vevprøver kan nedbrytes i en [[homogenisator]] eller med [[ultrasonikering]]. Celler kan behandles på samme måte som vev, eller ''lyseres''. Lysering av celler skjer ved at [[cellemembran]]en løses opp med en [[detergent]]. Lysatet man har utvunnet [[sentrifugering|sentrifugeres]] for å separere proteinene fra [[lipid]]er, [[cellekjerne]]r og andre cellestrukturer.

Proteinene i lysatet separeres deretter med [[SDS-PAGE]], en metode som separerer proteiner med hensyn til [[molekylmasse]] (eller molekylærvekt) som for proteiner måles i [[Atommasseenhet|Dalton]] (angis oftest med prefikset kilo, kDa). [[Natriumdodecylsulfat|SDS]] binder og denaturerer proteiner, og gjør dem negativt ladet. Proteinene får vandre i et elektrisk felt ved en [[polyakrylamid]]<nowiki></nowiki>gel, der de separeres.

Neste steg, kalt ''blotting'', er å overføre proteinene til en [[nitrocellulose]]- eller [[polyvinylidendifluorid]]membran (PVDF) med hjelp av en elektrisk spenning. Når proteinene er blitt overført, blokkes membranen for å forhindre uspesifikk binding av antistoffene til membranens overflate. Vanlige blokkløsninger lages av [[bovint serumalbumin]] (BSA) eller fettfri [[tørrmelk]]. 
 
Etter blokkingen appliseres et spesifikt antistoff (''primært antistoff'') på membranen, hvis spesifisitet gjør at det binder til det proteinet som er av interesse. Deretter appliseres et ''sekundært antistoff'' som binder til det primære antistoffet. Det sekundære antistoffet er lenket til et [[enzym]] hvis katalytiske egenskap omdanner et [[Substrat (kjemi)|substrat]] til et [[reaksjonsprodukt]] som kan detekteres, enten ved at man ser et fargeomslag på membranen, eller indirekte ved at man sender ut [[Luminescens|kjemiluminescent]] lys som kan fanges på lyssensitiv film, sees med [[CCD]]-kamera eller med en type [[phosphorimager]].